pbst(pbst每次漂洗多长时间)
资讯
2024-07-22
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1. pbst,pbst每次漂洗多长时间?
每次漂洗一般用半个小时
2. 为什么需要将样液稀释?
1)竞争抑制比较明显,应稀释竞争物;
2)以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
血清稀释用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有效降低ELISA本底,当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代PBS关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争,血清的稀释倍数肯定要事先确定,但也不用一点点,你做一个预试验即可,选择OD在1.0左右的稀释倍数,即你的竞争ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较敏感。
3. 为什么用PBST洗膜?
PBS是缓冲液,缓冲液能够维持稳定的PH值,用来洗膜,不会破坏掉膜上蛋白质和抗体的稳定性及二者的免疫结合。
PBST中的T是指Tween,是一种非离子型去污剂,作用是在不破坏蛋白的情况下,洗脱非特异性结合的抗体。
4. PBST缓冲液?
PBS中加入Twen-20是PBST缓冲液,为了有更好的洗涤效果,可以说是一种去污剂。
1× 2×是缓冲液浓度的意思。1×PBST缓冲液可以直接使用,2×PBST缓冲液需要稀释成1×PBST缓冲液之后使用。也就是说一半的2×PBST缓冲液加另一半的水就是1×PBST缓冲液。
5. pH梯度洗脱缓冲液一般用什么缓冲液?
PBST和TBST两种洗液我都用,用起来没有什么区别,都是提供一个缓冲的PH值环境,加上吐温20有助于蛋白的洗脱。PBST的磷酸缓冲液加Tween-20,而TBST是Tris缓冲液加Tween-20,具体用哪种得看你所研究的是蛋白的哪种功能,如研究某种酶的催化作用,PBST可能会对酶产生抑制作用,你就得考虑用TBST了PBS 与PBST的区别是PBST含有Tween-20成分,PBS 不含有。PBS,全称Phosphate Buffered Saline。在医学词汇中表示磷酸盐缓冲液,用于分子克隆及细胞培养,pH=7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。PBST是指PBS溶液加上Tween-20,Tween-20为一种非离子表面活性剂,对细胞生长可产生影响。一般刚开始做蛋白 表达都会搞不清他们区别,但是等你做久了,就会发现他们其中的妙处。
6. pbsr怎么配?
PBS作为生物实验中最常用的试剂,相信很多小伙伴都配置或者实验使用过。PBS是磷酸缓冲盐溶液(pHosphate buffer saline),一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。它具有盐平衡、可调整适宜pH、可以缓冲pH等特点。
PBS、蒸馏水和生理盐水三种溶剂该怎么选择呢?
蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;而生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应。
在实验室也常见PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸钠和磷酸钾。若只是化学反应,用PB溶液就行。在PB的基础上按照一定比例加NaCl,就可配置PBS;将磷酸钠和磷酸钾,NaCl,Tween-20按照一定比例,即可配成PBST溶液。
PBS配置过程
第一步,准备洗干净的瓶子和配置PBS所需的纯水。
第二步,根据所需要的PBS浓度确定各成分需要的量,不同实验室要求不一样,所以成分及用量会有区别。以我们细胞部门为例,我们配置的PBS成分如下:
试剂名称g/LKH2PO40.144NaCl9.0Na2HPO40.421
第三步,将称取的药品加入纯水搅拌至完全溶解。
第四步,将溶液pH调整至7.4左右。这里不同实验对溶液pH要求不一样,细胞部门主要是用于胰酶消化细胞,胰酶在偏碱性环境活性会强一点,所以细胞部门的pH可以稍微偏高一点,一般实验使用的话调整pH 7.2-7.4即可。
第五步,将配好的溶液定容到所需的体积,然后高温高压灭菌或者0.22um滤膜过滤除菌。时间充足的小伙伴可以高温高压灭菌,比较着急用的小伙伴可以直接0.22um滤膜过滤,其实效果是一样的。
第六步,等灭菌的PBS温度降下来或者过滤了就是无菌的PBS了,拧紧瓶盖,封上封口膜,就可以放在4度冰箱备用了。
7. pbs放在4℃为什么会结晶?
PBS为结晶聚合物,在4℃会结晶
PBS,即聚丁二酸丁二醇酯,分子式为HO-(CO-(CH2)2-CO-O-(CH2)4-O)n-H,状态为白色的颗粒,密度为1.26g/cm3,相对分子质量为2200,重均分子量(Mw)为5×104~30×104,熔点在114℃左右,结晶温度在75℃附近。PBS的玻璃化转变温度(-32℃)低于室温,但具有较高的结晶度(30%~45%)因而属于一种半结晶性塑料。
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1. pbst,pbst每次漂洗多长时间?
每次漂洗一般用半个小时
2. 为什么需要将样液稀释?
1)竞争抑制比较明显,应稀释竞争物;
2)以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
血清稀释用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有效降低ELISA本底,当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代PBS关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争,血清的稀释倍数肯定要事先确定,但也不用一点点,你做一个预试验即可,选择OD在1.0左右的稀释倍数,即你的竞争ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较敏感。
3. 为什么用PBST洗膜?
PBS是缓冲液,缓冲液能够维持稳定的PH值,用来洗膜,不会破坏掉膜上蛋白质和抗体的稳定性及二者的免疫结合。
PBST中的T是指Tween,是一种非离子型去污剂,作用是在不破坏蛋白的情况下,洗脱非特异性结合的抗体。
4. PBST缓冲液?
PBS中加入Twen-20是PBST缓冲液,为了有更好的洗涤效果,可以说是一种去污剂。
1× 2×是缓冲液浓度的意思。1×PBST缓冲液可以直接使用,2×PBST缓冲液需要稀释成1×PBST缓冲液之后使用。也就是说一半的2×PBST缓冲液加另一半的水就是1×PBST缓冲液。
5. pH梯度洗脱缓冲液一般用什么缓冲液?
PBST和TBST两种洗液我都用,用起来没有什么区别,都是提供一个缓冲的PH值环境,加上吐温20有助于蛋白的洗脱。PBST的磷酸缓冲液加Tween-20,而TBST是Tris缓冲液加Tween-20,具体用哪种得看你所研究的是蛋白的哪种功能,如研究某种酶的催化作用,PBST可能会对酶产生抑制作用,你就得考虑用TBST了PBS 与PBST的区别是PBST含有Tween-20成分,PBS 不含有。PBS,全称Phosphate Buffered Saline。在医学词汇中表示磷酸盐缓冲液,用于分子克隆及细胞培养,pH=7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。PBST是指PBS溶液加上Tween-20,Tween-20为一种非离子表面活性剂,对细胞生长可产生影响。一般刚开始做蛋白 表达都会搞不清他们区别,但是等你做久了,就会发现他们其中的妙处。
6. pbsr怎么配?
PBS作为生物实验中最常用的试剂,相信很多小伙伴都配置或者实验使用过。PBS是磷酸缓冲盐溶液(pHosphate buffer saline),一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。它具有盐平衡、可调整适宜pH、可以缓冲pH等特点。
PBS、蒸馏水和生理盐水三种溶剂该怎么选择呢?
蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;而生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应。
在实验室也常见PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸钠和磷酸钾。若只是化学反应,用PB溶液就行。在PB的基础上按照一定比例加NaCl,就可配置PBS;将磷酸钠和磷酸钾,NaCl,Tween-20按照一定比例,即可配成PBST溶液。
PBS配置过程
第一步,准备洗干净的瓶子和配置PBS所需的纯水。
第二步,根据所需要的PBS浓度确定各成分需要的量,不同实验室要求不一样,所以成分及用量会有区别。以我们细胞部门为例,我们配置的PBS成分如下:
试剂名称g/LKH2PO40.144NaCl9.0Na2HPO40.421
第三步,将称取的药品加入纯水搅拌至完全溶解。
第四步,将溶液pH调整至7.4左右。这里不同实验对溶液pH要求不一样,细胞部门主要是用于胰酶消化细胞,胰酶在偏碱性环境活性会强一点,所以细胞部门的pH可以稍微偏高一点,一般实验使用的话调整pH 7.2-7.4即可。
第五步,将配好的溶液定容到所需的体积,然后高温高压灭菌或者0.22um滤膜过滤除菌。时间充足的小伙伴可以高温高压灭菌,比较着急用的小伙伴可以直接0.22um滤膜过滤,其实效果是一样的。
第六步,等灭菌的PBS温度降下来或者过滤了就是无菌的PBS了,拧紧瓶盖,封上封口膜,就可以放在4度冰箱备用了。
7. pbs放在4℃为什么会结晶?
PBS为结晶聚合物,在4℃会结晶
PBS,即聚丁二酸丁二醇酯,分子式为HO-(CO-(CH2)2-CO-O-(CH2)4-O)n-H,状态为白色的颗粒,密度为1.26g/cm3,相对分子质量为2200,重均分子量(Mw)为5×104~30×104,熔点在114℃左右,结晶温度在75℃附近。PBS的玻璃化转变温度(-32℃)低于室温,但具有较高的结晶度(30%~45%)因而属于一种半结晶性塑料。
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